藏獒人工授精的步骤及常用技术要诀

　　犬的人工授精是指用人工的方法，将公犬的精液采取出来，通过严格的科学检查处理，用鲜精液或冷冻精液，输入到母犬的生殖器官内，使精子与卵子结合，达到繁殖优良犬的目的。

一、采精

1 ．采精的准备工作

（ 1 ）场地的准备 为了保证公犬有一个良好的性欲反射条件，必须选好采精的场地。采精场应宽敞、安静、清洁，并要彻底消毒。

（ 2 ）台犬的准备 目前多采用发情的母犬作为台犬。采精前台犬的后躯、尾根部、外阴部、肛门部位，都应彻底洗涤清洁，再用消毒过的干抹布擦干。

2 ．采精技术

（ 1 ）手握法 当公犬爬跨，阴茎勃起时，采精人员一只手抓住龟头的球状部位之后，另一只手拿着容器收集精液。在收集精液时，要特别注意器具不能触及龟头，否则会造成射精停止。另外，采精手应在龟头的背部必须保持一定的压力。用这种方法采到精液，可直接给发情的母犬输精，不宜保存。

（ 2 ）假阴道采精法 首先应根据公犬的阴茎大小制作阴道，其结构主要由外壳、内胎、采精杯及附件组成。在应用时先在假阴道内胎中装上热水，其温度应保持 40℃。假阴道内表面不必润滑剂，因为发情母犬阴道略显干燥。当公犬爬跨母犬时，将阴茎导入假阴道内、也可以用手淫的方法，待阴茎勃起时，推进阴道，另一只手持龟头后的阴茎，助手轻轻地打气，使假阴道产生一定的压力，以便刺激公犬继续射精。

二、精液品质检查

1 .精液量

藏獒的射精量，因其个体、年龄、采精方法、采精频率和营养状况等多种因素影响。射精量太多，可能是由于过多的副性腺泌物或其他异物混入，若过少可能是由于采精方法不当或生殖官功能衰退所致。发现这种情况就应该改进采精技术和方法，改进公大饲养管理或调整采精频率。

2 ．精液的色译大正常的精液为乳白色或灰白色，精子数量越多，乳白色越深。若精液呈淡绿色是混有浓液，呈淡红色是其中混有血液，呈黄色是混有尿液，凡属上述颜色的异常精液，应该丢弃或停止采精。

3 ．精子活率

是指精液中有改线前进运动的精子百分率，是评定精液品质优劣的重要指标之一，也称精子活力。检查方法是在载玻片上放1滴精液，用盖玻片压上，制成压片置于400倍的显微镜下观察。精子活率一般采用10级评分，即按精子直线前进运动的百分比评为10个等级： 100 ％前进者为 1 . 0 分，90 %前进的为0.9分，以下类推。

4 ．精子密度

是指精液的单位容积（1mL）内所含精子数目，是评定精液品质的一项重要指标，也称精子浓度。目前测定精子密度的方法主要采用估测法、血细胞计算器计算法 。

（ l ）估测法 此法通常与检查精子活率（不做稀释）同时进行，在显微镜下根据精子分布稠密程度粗略地分为“密”、“中”、“稀” 3 级。

① 密 整个视野充满精子，精子之间的空隙小于 l 个精子，看不见精子的活动情况，这种精液每毫升含有精子 10 亿以上。

② 中 精子在视野中比较分散，精子与精子之间的空隙约与精子本身长度相等，可以分清精子活动情况，这种精液每毫升含精子 3~10 亿。

③ 稀 在视野中只能见到少数精子，精子之间的空隙很大，这种精液每毫升含精子在 2 亿以下。

（ 2 ） 计算法 用血细胞计算器，在显微镜下计数，是比较准确的方法是先用血细胞吸管稀释精液之后将精液稀释20 倍时，用血红细胞吸管稀释：把精液稀释成 200 倍时，则用血红细胞吸管稀释。稀释液用 3 ％的氯化钠溶液，以杀死精子便于计算，其计数方法与血细胞计数相同。

5 ．精子的畸形率

是指形状不正常的精子。畸形情子种类很多，如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不清、皱缩、缺损、双头等，颈部膨大、纤细、屈折、双体等，主段弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺陷、带原生质滴、双尾等，精液中的畸形精子的比率越高，受孕率就越低。一般认为，犬精子畸形率不得超过 20%。

6 ．精子的存活时间及存活指数

是指离体精子在一定条件下的寿命，这是判断精子受精能力的一项指标。将精液采出后，应立即稀释1: 2 ~3 倍，将稀释精液置于一定的温度（0℃~37℃ ）下，间隔一定时间检查精子活率，直至无活动精子为止，所需的总小时数为存活时间；两相邻2次检查的平均活率（即 2 次活率相加÷2 ）与间隔时间的积相加总和为生存指数。精子的存活时间越长，指数越大，说明精子活力越强，品质也越好，受精率也越高。

7. pH 值的侧定
测定的方法是用万能试纸比色或电动比色来侧定，犬的精液ph值平均为 6 . 4 （ 6 . 1~7 . 0 ） , pH 值的高低与副性腺分泌物有关，第一部分精液 pH 值居中、第二部分精液的 pH 值最低；第三部分精液的 pH 值最。pH值偏低的品质较好， pH值偏高的精子活力、受精力都显著降低。

三、精液的稀释

精液稀释的目的在于增加精液的容量，扩大配种头数。稀释液的成分很多．大致可分为以下 4 类。

1 ．稀释剂

主要用以扩大精液容量，如等渗氯化纳溶液、等渗葡萄糖溶液等。

2 ．营养剂

主要提供营养，以补充精子所消耗的能量，如葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、鲜奶、奶制品、卵黄等。

3 ．保护剂

对精子起保护作用。其中有缓冲物质，如柠檬酸钠、酒石酸钾、钠、磷酸二氢钾、只羟甲基氨基甲烷、碱性缓冲液等；非电解物质，如各种糖类、氨基乙酸等；抗菌物质，如青霉素、链霉索、卡那霉素、林肯霉素、多黏菌素、氯霉素等；抗冻物质，二甲基亚飒等。

4 ．其他添加剂

酶类，如过氧化氢酶β一淀粉酶等；激素类，如缩宫类素，前列腺素 E 型等；维生素类维生素 B1、维生素B2、维生素B12、维生素 C 、维生素 E 等；其他成分，如二氧化碳、乙酸、乙二铵四乙酸、乙烯二醉、亚蹄酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、ATP 、精氨酸、咖啡因、冬眠灵等。

四、常用稀释液的配制

1．奶粉稀释液

奶粉 10~12g，放在三角烧杯内，然后加人燕馏水100mL , 搅拌均匀后过滤，进行蒸煮消毒。

葡萄糖（蔗搪）稀释液：无水葡萄粮7g，溶解于100mL 蒸馏水中，过滤，煮沸消毒 。

2 ．奶粉、卵黄稀释液

取奶粉 10g先用少量水调成糊状，再加蒸馏水至 100mL用纱布过滤，在水浴中加温至 95 ℃ ，待冷却后加入卵巢10mL，青霉素 10 万ug，链霉素 10 万ug。

稀释倍数，一般根据原精液的密度来决定，通常犬精液可稀释 l~3 倍。

五、 精液的保存

精液的保存方法，可分为常温（ 15 ℃ 一 25 ℃ ）．低温（ 0 ℃ ~5 ℃ ）和冷冻？（-79 ℃~-l96％ ℃ ）

1． 常温保存法

主要是利用一定范围的酸性环境抑制精子的活动，以减少其能全的消耗。常温有利于微生物的繁殖，故需加入一定的抗生素。此外，加入必要的营养和保护物质，也会有良好的作用。用卵黄、拘橼酸钠稀释犬的第二部分精液，保存 4 天，精子仍其有活力。

2 ．低温保存法

一般用冰箱或冰块作冷冻源，也可以将贮精瓶浸人井水中。低温可以抑制精子的活动，降低精子的活动能量消耗，但是冷的刺激又影响精子的生命。所以在稀释液中必项加入营养物质，如卵黄、奶粉等。犬的第二部分精液用等量的卵黄和 2 . 68 ％枸橼粉酸钠溶液稀释，在 4 ℃ 的条件下保存，96小时后还能有 50 ％的仔活率；用巴氏灭菌的牛奶做等里稀释，在 4 ℃ 条件下能保存120 小时，存活率为 50% ，并能使母犬受孕。

3 ．冷冻保存法

利用-196℃的液氮、干冰-79℃ 或其他制冷设备作为冷冻源，将精液经过特殊处理后，保存在超低温下，以达到长期保存的目的。因分装形式不同，分为颗粒精液、塑料细管精液和安瓶冷冻精液。据报道，犬的冷冻精液解冻后活力低，受精率很低，有待于进一步研究，但取鲜精做人工授精，受精率较高，也是提纯复壮的好办法和可行技术。

六、输精

输精是指用输精器把精液愉送到母犬的生殖道内，使母犬达到受精的方法。

1．母犬的准备

将发情母犬保定后，尾巴拉向一边，将阴门及附近用温肥皂水擦洗 干净，并用消毒液进行消毒，而后再用生理盐水冲洗，之后擦干净。

2 ．输精管的准备

犬的输精管可用尼龙导管、玻璃细管等，使用前应彻底消和认真的检查，不能出漏洞。

3. 精液的准备

新采取的精液，经稀释后应进行品质检查，然后进行输精。保存的精液，需要升温到 35 ℃ 左右，经过镜检后合乎标准时，方可用来输精。

4 ．输精方法

将母犬站立保定，使输精管沿着背线方向缓慢地旋转插入阴道7~10cm深，于子宫颈口的位置，慢慢注人精液，输完精后，母犬的后躯抬高片刻，以防止精液流出。